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pCDNA3.1-CMV-UBE2O（human)-bGH pA-SV40-Neo
产品基本信息
| 产品名称 | pCDNA3.1-CMV-UBE2O（human)-bGHpA-SV40-Neo | ||
| 基因名称 | UBE2O | 物种 | 人（human) |
| 基因全称 | ubiquitin conjugating enzymeE2 O | 基因转录本 | NM_022066.4 |
| 基因别称 | E2-230K | 表达蛋白 | NP_071349.3 |
| 基因ID | 63893 | 转录本长度 | 3879bp |
| 拷贝数 | 高 | 筛选抗性 | Neo/G418 |
| 培养温度 | 37°C | 标签 | 无 |
| 原核抗性 | Kan | 荧光标记 | 无 |
基因基本信息
1. 人UBE2O 基因编码一种结构独特、功能多样的泛素结合酶，在细胞信号转导及多种疾病（尤其是癌症）中扮演着关键角色。
2. UBE2O基因位于人类17号染色体长臂2区5带1亚带（17q25.1），其参考基因组（GRCh38）上的位置为 chr17:76,389,456-76,453,152（互补链），全长约63.7 kb，该基因包含18个外显子，编码一个由1,313个氨基酸组成的蛋白质。
3. UBE2O蛋白的独特之处在于其E2与E3的杂合结构。它在一个多肽链上同时包含了类似E2的催化结构域和类似E3的底物识别结构域，使其能独立完成底物泛素化。
4. 蛋白结构从N端到C端依次为：a.CR1-CR2结构域 (N端保守区域1和2)：主要参与底物和接头蛋白的结合，是识别多种底物的基础；b.卷曲螺旋结构域 (Coiled-Coil, CC)：功能尚未完全明确，但可能参与蛋白质的构象维持或二聚化。c.UBC结构域 (泛素结合结构域)：位于蛋白质C端附近，包含催化活性位点半胱氨酸Cys1040，负责执行泛素分子的转移；4.CTR结构域 (C端调控结构域)：包含CR3区域，可能参与调节酶的活性。
5. UBE2O是已知的、极少数可以不依赖E3连接酶而直接催化底物泛素化的E2/E3杂合酶之一，它通过N端的CR结构域直接识别并结合底物，再由C端的UBC结构域完成泛素的转移。
1.载体构建出库标准是什么？
载体出库默认小提质粒出库，质粒量≥4ug，含甘油菌和穿刺菌。如需要无内毒素质粒提取质粒，我司可提供无内毒素质粒提取业务。
无内毒素质粒中提（A) | 质粒量≥35ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提(B) | 无内毒素中提出库是质粒量≥100ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提 | 无内毒素大提出库是质粒量≥500ug，浓度大于≥500ng/uL |
2.甘油菌保存方法？
甘油菌50%（v/v）=新鲜菌种：灭菌甘油制备而成，收到甘油菌可直接放-80保存1年
3.甘油菌的复苏方法？
从甘油冻存菌中复苏细菌，在无菌条件下，打开盖子，使用无菌接种环或灭菌枪头从冻存管中取适量冻存菌，划线接种到LB板（含有合适抗生素或无抗）上。操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化。在合适的温度条件下，将划线接种的LB板进行过夜培养。过夜培养后，挑取单个克隆进行后续操作。
4.穿刺菌的保存方法？
穿刺菌为无菌枪头取新鲜菌液，然后接种形成穿刺菌，穿刺接种的细菌在温箱中孵育过夜，并在第二天上午检查其是否生长，确保制备的穿刺菌表面上能看到细菌后冰袋邮寄发货。穿刺菌4°C保存时间不超过30d，收到穿刺菌后须在2周内，在含有相应抗生素（抗性信息可在质粒图谱中查看）琼脂平板上划线培养出单菌落，挑取单个克隆进行后续操作。
5.无内毒素质粒提取菌液制备建议方法？
制备起始培养物制备：从甘油菌或者穿刺菌制备的单克隆菌落平板中，挑取新鲜的单克隆菌落，接种于2–5 mL含有相应选择性抗生素的LB培养基中，在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养约8小时（使用的试管或锥形瓶体积应至少为培养物体积的4倍）。
将起始培养物按1/500至1/1000的比例稀释到选择性LB培养基中。在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养12–16小时（使用的锥形瓶或容器体积应至少为培养物体积的4倍）后用商品化的无内毒素质粒试剂盒提取，提取的无内毒素质粒用于后续细胞转染或病毒包装等。
注意：无内毒素提取的质粒建议通过酶切鉴定和测序鉴定与原质粒无差异后进行后续实验。避免质粒提取或菌液接种过程所引起的菌液交叉污染。
9.测序结果原始文件用什么打开？
测序结果原始文件可以用 Snapgene 软件，DNAman分析软件等进行分析。
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