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pcDNA3.1-FAP（human)-V5-6xHis-bGH pA-sv40-NeoR
产品基本信息
| 产品名称 | pcDNA3.1-FAP(human)-V5-6xHis-bGH pA-sv40-Neo | ||
| 基因名称 | FAP | 物种 | 人（human） |
| 基因全称 | fibroblast activation protein alpha | 基因转录本 | NM_001291807.3 |
| 基因别称 | FAPA; SIMP; DPPIV; FAPalpha | 表达蛋白 | NP_001278736.1 |
| 基因ID | 2191 | 转录本长度 | 2280bp |
| 拷贝数 | 高 | 筛选抗性 | Neo/G418 |
| 培养温度 | 37°C | 标签 | V5+6xHis |
| 原核抗性 | Amp+ | 荧光标记 | 无 |
基因基本信息
成纤维细胞激活蛋白α（Fibroblast Activation Protein Alpha, FAP）是由人FAP基因编码的一种II型跨膜丝氨酸蛋白酶，属于脯氨酰寡肽酶家族S9B成员。该基因定位于人类2号染色体q24.2区段（2q24.2），全长约70 kb，由26个外显子和25个内含子组成。FAP在正常成人组织中几乎不表达，却在超过90%的上皮性肿瘤基质成纤维细胞中特异性高表达，同时在胚胎发育、组织修复和纤维化疾病中也呈现诱导性表达。这种严格的表达调控使其成为肿瘤微环境研究中最受关注的分子靶点之一。
FAP兼具二肽基肽酶和内肽酶双重酶学活性，能够切割多种底物，包括α2-抗纤溶酶、神经肽Y、B型利钠肽等，并参与TGF-β的活化过程。通过降解细胞外基质、调节信号通路、促进血管生成和诱导免疫抑制等多种机制，FAP在肿瘤进展中发挥关键作用。在胚胎发育过程中，FAP在某些间充质组织中呈瞬时表达，但在大多数正常成人组织中则几乎检测不到。其重新表达主要发生在组织重塑的病理生理条件下，包括肿瘤基质、伤口愈合部位、关节炎和纤维化组织。
FAP的诱导表达受多种信号通路调控。TGF-β是诱导成纤维细胞向FAP阳性肌成纤维细胞转化的关键因子。在肿瘤微环境中，癌细胞分泌的多种细胞因子和生长因子可刺激基质成纤维细胞活化并上调FAP表达。FAP启动子区域的转录调控元件和表观遗传修饰机制是目前研究的热点。FAP基因在特定细胞类型的表达具有高度特异性。虽然其名称提示“成纤维细胞特异性”，但在某些肿瘤中，FAP也可表达于脂肪细胞、周细胞和部分免疫细胞。近年来研究发现，FAP在多种肿瘤细胞中也有表达，表明其表达谱可能比最初认为的更为广泛。
1.载体构建出库标准是什么？
载体出库默认小提质粒出库，质粒量≥4ug，含甘油菌和穿刺菌。如需要无内毒素质粒提取质粒，我司可提供无内毒素质粒提取业务。
无内毒素质粒中提（A) | 质粒量≥35ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提(B) | 无内毒素中提出库是质粒量≥100ug，浓度≥500ng/uL |
无内毒素质粒大提 | 无内毒素大提出库是质粒量≥500ug，浓度大于≥500ng/uL |
2.甘油菌保存方法？
甘油菌50%（v/v）=新鲜菌种：灭菌甘油制备而成，收到甘油菌可直接放-80保存1年
3.甘油菌的复苏方法？
从甘油冻存菌中复苏细菌，在无菌条件下，打开盖子，使用无菌接种环或灭菌枪头从冻存管中取适量冻存菌，划线接种到LB板（含有合适抗生素或无抗）上。操作应适当快一些，以减少冻存管内的融化。在合适的温度条件下，将划线接种的LB板进行过夜培养。过夜培养后，挑取单个克隆进行后续操作。
4.穿刺菌的保存方法？
穿刺菌为无菌枪头取新鲜菌液，然后接种形成穿刺菌，穿刺接种的细菌在温箱中孵育过夜，并在第二天上午检查其是否生长，确保制备的穿刺菌表面上能看到细菌后冰袋邮寄发货。穿刺菌4°C保存时间不超过30d，收到穿刺菌后须在2周内，在含有相应抗生素（抗性信息可在质粒图谱中查看）琼脂平板上划线培养出单菌落，挑取单个克隆进行后续操作。
5.无内毒素质粒提取菌液制备建议方法？
制备起始培养物制备：从甘油菌或者穿刺菌制备的单克隆菌落平板中，挑取新鲜的单克隆菌落，接种于2–5 mL含有相应选择性抗生素的LB培养基中，在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养约8小时（使用的试管或锥形瓶体积应至少为培养物体积的4倍）。
将起始培养物按1/500至1/1000的比例稀释到选择性LB培养基中。在37°C下，约300 rpm剧烈振荡培养12–16小时（使用的锥形瓶或容器体积应至少为培养物体积的4倍）后用商品化的无内毒素质粒试剂盒提取，提取的无内毒素质粒用于后续细胞转染或病毒包装等。
注意：无内毒素提取的质粒建议通过酶切鉴定和测序鉴定与原质粒无差异后进行后续实验。避免质粒提取或菌液接种过程所引起的菌液交叉污染。
9.测序结果原始文件用什么打开？
测序结果原始文件可以用 Snapgene 软件，DNAman分析软件等进行分析。
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