一、Car-T 细胞背景介绍

CAR-T细胞疗法（Chimeric Antigen Receptor T-Cell        Therapy），全称为嵌合抗原受体T细胞疗法，是近年来发展非常迅速的一种细胞治疗技术。

免疫细胞Car-T疗法首先是采集肿瘤患者外周血细胞并分离患者T细胞；第二步通过基因工程的手段，一般通过慢病毒，逆转录病毒，基因定点敲入等方法，给T细胞整合靶向肿瘤细胞的抗体（即Car），生成Car-T细胞；第三步将Car-T细胞进行体外培养和扩增，达到一定数量，质检后回输到患者体内，靶向杀死肿瘤细胞，同时避免对正常组织的损伤。

血液肿瘤常用CAR-T靶点

实体瘤的CAR-T细胞治疗面临肿瘤微环境，抗原异质性，CAR-T细胞的穿透力差，持续性和增殖能力低等特点，相比于血液肿瘤，实体瘤的靶点选择更为复杂

二、Car结构

CAR的主要结构可以分为三个部分：

（一）、胞外结构域：由单克隆抗体的单链可变片段（scFv,single-chain variable fragment）构成，该片段由轻链（VL）和重链（VH）的可变区通过短链Gly4Ser）n连接而成的，主要负责识别和结合肿瘤细胞表面的抗原。

胞外结构域还包括一个铰链区（Hinge），它连接scFv和跨膜结构域，通过允许scFv部分在膜表面移动，铰链区有助于优化CAR与目标抗原的结合效率。灵活的铰链区可以帮助CAR适应不同的抗原结构，增加结合的稳定性和亲和力。常用的铰链区来源于CD28的氨基酸序列，CD28是一种重要的共刺激分子，其铰链区可以提供稳定的连接，并增强T细胞的激活。

图2：1-5代Car-T结构示意图

（二）、跨膜结构域：位于细胞膜上，起到将CAR分子锚定在细胞膜上的作用。它连接胞外结构域和胞内结构域，确保整个CAR分子的稳定性和功能。跨膜结构域可以来源于不同的免疫受体，如T细胞受体（TCR）、B细胞受体（BCR）或其它受体。选择不同来源的跨膜结构域可能影响CAR的表达和功能，常用的跨膜结构域来源于CD4，CD8α，CD28和CD3ζ。

（三）、胞内结构域：包含共刺激结构域和信号转导结构域。

共刺激结构域通常包括如4-1BB、CD28等分子，提供T细胞活化的第二信号。4-1BB作为CAR结构中的共刺激结构域，协同刺激分子和活化细胞内信号，使T细胞持续增殖并释放细胞因子，从而提高T细胞的抗肿瘤能力。

4-1BB共刺激域可促进线粒体生成，增强T细胞的呼吸作用和脂肪酸氧化。在抗原刺激后，配备4-1BB的CAR-T细胞会优先分化为中央记忆T细胞，有助于增强CAR-T细胞的持久性和抗肿瘤效果。另外4-1BB的信号转导依赖于TRAFs蛋白。当4-1BB与其配体或激动性抗体结合时，会聚集并招募TRAF1和TRAF2形成异源三聚体，这一过程激活下游信号级联，包括JNK/SAPK和P38MAPK等，最终通过转录因子NF-κB调节4-1BB信号，促使细胞因子的产生和分泌。

信号转导结构域主要由CD3ζ链组成，它是T细胞受体复合物的关键部分，负责将抗原识别信号转化为T细胞活化的信号。CD3ζ（CD3        zeta chain）是T细胞受体（T-cell        receptor：TCR）复合物中的一个重要组成部分，属于免疫细胞的信号转导分子。是CD3复合体的四个信号传导链之一，与CD3ε、CD3γ、CD3δ一起形成TCR复合体。CD3ζ链含有三个免疫受体酪氨酸激酶（ITAM）结构域，ITAM1(Y72,Y82),ITAM2(Y111,Y123),ITAM3(Y142,Y153)

ITAM结构域能够在T细胞接收到抗原信号时，招募并激活下游的信号转导分子(如ZAP-70，Syk，PLC-γ，MAPK，NF-κB，PI3K/Akt等）激活T细胞。

三、服务内容

基恩科生物依托公司在基因递送和基因编辑平台的服务优势，可以为Car-T细胞治疗研究提供工具性的产品和服务，更高效的进行Car-T相关研发和治疗。