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非整合慢病毒(IDLV)

       

基恩科生物(Genecarer)非整合慢病毒(Integrase-deficient lentivirus,简称IDLV)是在慢病毒载体基础上经过基因改造对整合酶基因进行突变改造,由此推出的整合酶缺陷的和整合酶调节基因突变的的GC-Lenti-ID非整合慢病毒包装系统。这种整合酶缺陷型的慢病毒在目的细胞中产生了环状附加体,游离于目的细胞基因组外,这些载体在分裂细胞中瞬时表达,但在非分裂细胞中稳定表达。


      
与整合型慢病毒相比,GC-Lenti-ID导致插入突变的风险大大降低,适合与普通方法难转染的原代细胞、干细胞和iPS细胞,应用于RNA干扰、同源重组等研究应用。


      
GC-Lenti-ID非整合慢病毒包装系统属于第三代的包装系统,将慢病毒的反式作用原件gag、pol,env等基因用辅助质粒表达(GC ID helper1.0)表达,表达水泡性口腔炎病毒(VSV)糖蛋白(G)的包膜蛋白载体(GC ID helper2.0),表达突变gag质粒载体(GC ID helper3.0)四质粒共转染HEK -293T细胞,收集病毒,病毒浓缩纯化,病毒滴度测定和质量检测,四质粒系统能大大降低复制病毒的可能性,生物安全性进一步提高。


一、IDLV慢病毒包装服务:
       基恩科生物(GeneCarer)根据实验目的需要构建不同的表达载体(过表达、敲除、干扰)等,GC ID helper 1.0质粒和GC ID helpher 2.0质粒,GC ID helper3.0,以及表达载体4质粒用磷酸钙法共转染293T细胞,48h,96h各收集一次上清,进行过滤、离心、浓缩、纯化,分装后进行病毒滴度测定和质量检测。


二、非整合慢病毒载体的选择:

       基恩科生物(GeneCarer)提供各种载体可供选择,不同启动子,不同筛选标记,不同标签蛋白。



三、慢病毒的质量控制:   

       基恩科生物(GeneCarer)结合《中国药典》,多糖结合病毒疫苗中针对疫苗制剂等提出的产品质量和安全性的要求,同时针对细胞实验用病毒/动物实验用病毒/临床用病毒的不同需求,建立企业病毒产品质量标准,每一批病毒产品都经过质量部严格检测,测定慢病毒的滴度、纯度和各项生物物理指标。
 

检测项目

检测方法

质量标准参考结果

颜色

肉眼判定

无色

澄清度

肉眼判定

透明,无异物

粘稠度

移液器吸取

无粘稠和吸液滞后现象

PH

笔式PH计

7.2-7.4

细菌

平板培养法

阴性

真菌

平板培养法

阴性

支原体

Nest PCR

阴性

内毒素

鲎试剂

≤50TU/mL

纯度

SDS-PAGE(银染)

无杂带

有效滴度

qPCR法

≥2E+8TU



四、非整合慢病毒定制服务:

       基恩科生物(GeneCarer)提供非整合慢病毒现货定制服务,提供基因(含circRNA 、lncRNA、microRNA等)过表达、基因干扰、基因敲除慢病毒,具体实验服务流程如下图:

       

五、非整合慢病毒与其他病毒载体的比较


病毒包装系统

非整合慢病毒

慢病毒

腺病毒

腺相关病毒

单纯疱疹病毒

包装容量

8Kb

8Kb

8Kb

4.7Kb

理论最大150kb

病毒基因组

RNA病毒

RNA病毒

双链线性DNA病毒

单链线性DNA病毒

双链线性DNA病毒

感染细胞类型

大部分分裂/不分裂细胞

大部分分裂/不分裂细胞

大部分分裂/不分裂细胞,原代细胞感染率高

不同血清型感染不同细胞

大部分分裂/不分裂细胞,神经元细胞感染率高

感染效率

基因组整合

非整合

整合

非整合

非整合/部分整合

非整合

表达方式

瞬时表达

稳定表达

瞬时表达

瞬时表达/部分长期表达

瞬时表达

免疫原性

低免疫原性

低免疫原性

高免疫原性

低免疫原性

高免疫原性